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ELISA試劑盒操作時(shí)包括6個(gè)步驟：
1）抗原或抗體吸附于固相
2）加標(biāo)本和試劑
3）孵育和沖洗
4）加酶標(biāo)抗原或抗體
5）加適當(dāng)?shù)牡孜?br />6）檢測(cè)和分析結(jié)果

實(shí)驗(yàn)時(shí)標(biāo)本的處理：
A、請(qǐng)使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量，預(yù)留充足的樣本。
B、實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)標(biāo)本含量，如果標(biāo)本濃度過(guò)高，應(yīng)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行稀釋，使稀釋后的標(biāo)本符合試劑盒的檢測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)，標(biāo)本使用0.01mol/L的PBS稀釋(PH=7.0-7.2)。
C、若所檢樣本不包含在說(shuō)明書所列樣本之中，建議進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其有效性，并注意留存樣本。
D、使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會(huì)由于化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。
E、若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清，因該類樣本干擾因素較多，如：細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞數(shù)量、采樣時(shí)間等，所以可能存在檢測(cè)不出的情況。
F、某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白，可能因?yàn)榕c本產(chǎn)品所使用的檢測(cè)抗體及捕獲抗體不匹配，而不被檢測(cè)出。
G、建議使用新鮮樣本，保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能會(huì)存在蛋白降解或變性導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。